BIOKIMIA : Menaksir aras kreatinin dalam serum dan urin.

OBJEKTIF :

Mentaksir kreatinin menggunakan Keadah Jaffe.

TEORI :

Kaedah yang biasa digunakan untuk analisis kreatinin ialah

kaedah tindakbalas Jaffe. Tindakbalas ini menggunakan asid pikrik dalam larutan beralkali yang bertindakbals dengan kreatinin membentuk sebatian berwarna iaitu kreatinin-pikrik. Masalah utama tindakbalas ini ialah kehadiran interferen seperti glukosa, protien, asid askorbik dan asid keto.

REAGEN : ·

Asid Tungstik

· larutan 0.036M Asid pikrik

· Larutan 1.4M natrium hidroksida

· Larutan simpanan piawai kreatinin ( 100mg/dL )

· Larutan kerja piawai kreatinin

BAHAN : · Serum

BIOLOGI · Urin

BAHAN : · Tabung uji empar

KACA · tabung uji kaca

ALAT : · Spektrofotometer

RADAS · Pengempar

KAEDAH : Spesimen Urin

1. Peringkat pertama :

v Spesimen urin dicairkan 1:20 dengan air suling.

v 4.0ml larutan asid tungstik dipipetkan dan 0.5ml urin yang telah dicairkan.

v Larutan disebatikan.

v Larutan didalam tabung uji dibiarkan selama 10 minit sebelum diemparkan pada hadlaju 1500psm selama 2 minit untuk mendapatkan supernatan.

2. Peringkat kedua : Peringkat tindakbalas

v Tabung uji 15 x 150mm disedia dan ditanda seperti berikut :

Tabung uji 1	K ( kosong )
Tabung uji 2	P ( piawai )
Tabung uji 3	U ( ujian )

v Larutan seperti di bawah dipipetkan ke dalam tabung uji.

	Kosong ( K ) ml	Piawai ( P ) ml	Ujian ( U ) ml
Air suling	3.0	2.9	-
Laruatn piawai 10mg/dL	-	0.1	-
Supernatan Urin	-	-	3.0
0.036M asid pikrik dan sebatikan	1.0	1.0	1.0
1.4M NaOH	0.5	0.5	0.5

v Larutan didalam tabung uji disebatikan dan dibiarkan selama 15 minit ditempat yang gelap.

v Bacaan absorbans dibaca di spektrofotometer pada

540 nm. ( Gunakan K sebagai pengosong ).

KEPUTUSAN :

Tabung uji	Kosong ( K )	Piawai ( P )	Ujian ( U )
Absorbans	0.000	0.012	x

Pengiraan : Berdasarkan Hukum Beer

Mg kreatinin serum daalm 100ml serum

Abs U x faktor x kepekatan piawai ( 10mg/dl )

     Abs P

factor : 30 / 45

Keputusan bagi ujian ini tidak diperolehi .

JULAT RUJUKAN : 0.7-0.2mg /100ml

KAEDAH : Spesimen Serum

3. Pemisahan protien :

v 1 tabung empar yang berisipadu 15 ml diambil dan ditandakan dengan label – label berikut :

Larutan Tungstik	4.0ml
Serum	0.5ml

v Tabung empar dibiarkan selama 10 minit dan diemparkan.

4. Tindakbalas kimia

v Tabung uji 15 x 150mm disedia dan ditanda seperti berikut :

Tabung uji 1	K ( kosong )
Tabung uji 2	P ( piawai )
Tabung uji 3	U ( ujian )

v Larutan seperti di bawah dipipetkan ke dalam tabung uji.

	Kosong ( K ) ml	Piawai ( P ) ml	Ujian ( U ) ml
Air suling	3.0	2.9	-
Laruatn piawai 10mg/dL	-	0.1	-
Supernatan	-	-	3.0
0.036M asid pikrik dan sebatikan	1.0	1.0	1.0
1.4M NaOH	0.5	0.5	0.5

v Larutan didalam tabung uji disebatikan dan dibiarkan selama 15 minit ditempat yang gelap.

v Bacaan absorbans dibaca di spektrofotometer pada

540 nm. ( Gunakan K sebagai pengosong ).

KEPUTUSAN :

Tabung uji	Kosong ( K )	Piawai ( P )	Ujian ( U )
Absorbans	0.000	0.103	0.106

Pengiraan : Berdasarkan Hukum Beer

Mg kreatinin serum daalm 100ml serum

Abs U x faktor x kepekatan piawai ( 0.001 g/dl )

    Abs P

0.106 x 30 / 45 x kepekatan piawai ( 0.001 g/dl )

    0.103

6.861 mg /dl

JULAT RUJUKAN : 1-2 g / 24 jam

PERBINCANGAN :

Kaedah yang digunakan untuk menaksir aras kreatinin dalam serum

dan urin ialah Kaedah Jaffe . Kaedah ini sangat penting dan melibatkan

tindak balas yang berlaku di antara asid pikrik dalam larutan beralkali

dan kreatinin untuk membentuk satu sebatian berwarna iaitu kreatinin-

pikrik yang berwarna oren .

Dalam eksperimen ini ,spesimen yang digunakan adalah serum dan

urin . Penambahan asid pikrik dan larutan natrium hidroksida atau

NaoH adalah bertujuan untuk menghasilkan warna oren bagi

mengukur kepekatan kreatinin menggunakan spektrofotometer .

Tujuan lain ialah untuk memastikan bahan yang terhasil adalah

kreatinin bukannya asid urik ataupun piruvat . Ini penting untuk

memperolehi keputusan yang tepat tanpa sebarang ralat .

Keputusan yang diperolehi bagi spesimen serum adalah 6.861 mg/dl .

Keputusan aras kreatinin yang diperolehi adalah lebih dari julat

normalnya iaitu 0.7 hingga 2.0 ml . Ini disebabkan oleh pengambilan

sample serum kurang daripada nilai yang dikehendaki dan penggunaan

kuvet yang tidak bersih menyebabkan aras kreatinin melebihi julat

normal .

Keputusan yang kami perolehi berbeza dengan kumpulan lain.antara

keputusannya adalah 1.911 mg/dl dan 4.511mg/dl .Ini terjadi

disebabakan sample yang digunakan telah lama dan sel telah lisis .

Manakala kami tidak memperolehi sebarang keputusan bagi mentaksir

aras kreatinin dalam urin kerana urin tidak diempar terlebih dahulu

selepas dilakukan factor pencairan 1:20 menyebabkan urin menjadi

pekat .Selain itu , kesilapan semasa pengambilan sample yang salah

turut mempengaruhi keputusan .

KESIMPULAN :

Keputusan yang diperolehi adalah 6.861 bagi serum dan tiada keputusan

bagi urin . Aras kreatinin dalam serum dan urin adalah abnormal .

SUMBER :Pelajar yang mengambil subjek ini.