Pengenalan :
Teknik Kepekatan bertujuan untuk memisahkan objek parasit (sista dan trofozoit protozoa,larva,telur helmit dan peringkat dewasa helmit )daripada feses berdasarkan perbezaan gravity spesifik.Teknik ini digunakan untuk mengesan infeksi ringan dimana teknik apusan feses langsung biasanya negative.
· Kaedah kepekatan melibatkan :
1) Teknik Pemendapan – menggunakan larutan yang mempunyai gravity spesifik yang lebih rendah daripada objek parasit .Parasit terkumpul di di bahagian dasar.
Teknik ini melibatkan 2 jenis teknik iaitu:
a) Teknik Pemendapan Graviti ( mudah )
b) Teknik Pemendapan Formalin – Eter
Teknik Pemendapan Graviti
Prinsip /objektif:
Teknik pemendapan gravity adalah suatu teknik kualitatif yang paling mudah dan boleh diguna untuk mendapatkan semua jenis telur ,larva helmit dan sista protozoa.Teknik ini dapat dilakukan dengan membancuh bahan feses dengan air dan membiarkannya mendap.Teknik ini merupakan sutu gabungan penapisan dan pencucian daripada kepekatan kerana specimen yang digunakan biasanya mengandungi banyak bahan bendasing.Objek parasit akan mendap ke bawah manakala bahan feses yang ringan akan terapung.
Kebaikan :
· Sesuai untuk mengumpul telur dari semua spesies helmint.
· Tidak mengubah bentuk/morfologi parasit dan boleh didapati peringkat parasit yang masih hidup.
· Boleh memproses banyak bahan dalam satu bekas
Kelemahan :
· Memerlukan masa kerja yang panjang
· Terhad untuk kajian kualitatif sahaja
· Kurang sesuai untuk protozoa usus
Alat radas/meterial:
· Feses
· Air paip
· Bikar
· Pipet panjang
· Kain kasa
· Slaid kaca
· Penutup kaca
Kaedah/Prosedur :
1. Satu sudu besar specimen feses diletakan ke dalam kain kasar yang telah disediakan didalam bikar
2. Specimen feses dalam kain kasa disebatikan dengan 50ml air paip untuk mendapatkan satu ampaian halus dalam bekas tersebut
3. Dibawah air yang mengalir,sebatikan lagi spesiman feses sehingga bikar itu di penuhi dengan ampaian.
4. Biarkan 10 minit dan buangkan supernatant.Isikan semula dengan air paip ,sebati dan biarkan ampaian mendap sekali lagi.
5. Ulangi langkah 4 sehingga cecair supernatant menjadi jernih dan bersih
6. Dengan menggunakan pipet titiskan setitik mendapan ke atas sisip kaca yang bersih
7. Letakan penutup kaca ,kemudian periksa dibawah mikroskop.
Teknik pemendapan formalin - eter
Prinsip /objektif :
Teknik ini merupakan suatu teknik kualitatif.teknik ini sesuai untuk mendapatkan telur helmint dan sista protozoa daripada feses.pengguna formalin eter boleh meningkatkan keberkesanan pengemparan.formalin berfungsi sebagai bahan pengawet manakala eter akan diserap oleh bahan feses dan menjadikannya lebih ringan daripada air.pada akhir pengemparan bahan feses mendap sebagai suatu mass di bahagian atas ampaian betul-betul dibawah eter.telur helmint dan sista protozoa tidak akan terjejas dan mendap di bahagian dasar bersama – sama partikel lain yang berukuran dan berketumpatan sama.teknik ini sesuai bagi kepekatan telur – telur dan larva helmint serta sista – sista protozoa.teknik ini juga digunakan apabila teknik zink sulfat didapati tidak sesuai untuk specimen feses yang mengandungi banyak lemak dan asid lemak.ia juga boleh digunakan ke atas spesiman fese yang telah di awetkan dalam formalin.telur trematod dan telur – telur lain yang berat boleh juga dikesan melalaui teknik ini.
Alat radas/meterial:
· Feses
· Pengempar
· Tabung pengempar
· Kain kasa
· Bikar
· Slaid kaca
· Penutup slaid
· Pipet panjang
· Formalin dan eter
Kaedah/prosedur:
1. 1ml specimen feses dampaikan dengan 3ml air paip dalam sebuah tabung pengempar
2. Air paip di tambah sehingga penuh ,sebatikan dan saring melalui dua lapisan kain kasan ke dalam bikar
3. Hasil saringan (filtrate)di tuang ke dalam tabung pengempar emparlan selama 1 minit pada kelajuan 2000psm
4. Cecair supernatant dibuang dan masukkan 7ml larutan 10%nformalin dan sebatikan.biarkan selama 10 minit.
5. 3ml eter dipipet ke dalam tabung pengempar,tutup dan goncang sekuat –kuatnya selama 1-2 minit
6. Emparkan selama 2 minit pada kelajuan 1500psm
7. Buang ‘plug’ dan cecair supernatant dengan mencondongkan tabung emparan sambil perhatikan mendapan tidak terganggu.
8. Sediakan setitik mendapan dengan setitik iodine diatas sisip kaca
9. Penutup kaca di letakkan ke atas sisisp kaca untuk diperiksa di bawah mikroskop.
TEKNIK PENGAPUNGAN
Pengenalan :
Feses di larutkan ke dalam larutan yang mempunyai gravity spesifik yang lebih tinggi daripada telur cacing dan sista protozoa.dengan ini telur dan sista terapung di permukaan larutan.Untuk mengapungkan sista dan telur ,larutan bukan sahaja mesti mempunyai gravity spesifik yang diperlukan tetapi ia juga tidak seharusnya mengubah gravity spesifik sista atau telur sehingga menyebabkan objek ini mengembang atau mengecut.
Teknik pengapungan melibatkan 2 teknik :
· Teknik pengapungan zink sulfat
· Teknik pengapungan brine (NaCl tepu)
Teknik Pengapungan Zink Sulfat
Prinsip/objektif :
Teknik ini adalah berdasarkan kepada prinsip pengapungan telur – telur cacing dan sista protozoa.Cara ini adalah sesuai sekali bagi kepekatan sista protozoa,telur helmint dan larva dalam keadaan di mana diagnosis mudah dilakukan.
Kebaikan :
· Suatu teknik kualitatif.sesuai untuk mengumpulkan sista protozoa dan juga telur helmint
Kelemahan :
· Tidak sesuai untuk telur trematod,telur cacing pita yang besar dan telur yang mempunyai gravity spesifik yang lebih tinggi daripada larutan
· Tidak sesuai untuk mendapatkan larva helmint
· Tidak sesuai untuk feses berlemak
Alat radas/material :
· Feses
· Bikar
· Kain kasa
· Larutan zink sulfat (SG 1.18)
· Tabung pengempar
· Pengempar
Prosedur/kaedah :
1. Sediakan larutan ampaian feses dengan menghancurkan lebih kurang 10 bahagian air paip dengan 1 bahagian fese (lebih kurang 1/3 ml feses) dalam bikar
2. Tabung emparan di isi penuh dengan air paip tuangkannya ke dalam bikar
3. Ampaian feses dituang balik ke dalam tabung emparan dengan meninggalkan bahan – bahan feses yang lebih kasar dalam bikar
4. Tabung emparan di imbang dengan tabung emparan yang lain dan emparkan selama 1 minit pada kelajuan yang tertinggi (2300 psm )
5. Cecair supernatant dibuangkan dan 1-2 ml larutan zink sulfat 33% SG 1 -18 di campurkan.
6. Tambah lagi larutan zink sulfate hingga penuh serta sebatikan ampaian
7. Saring ampaian feses melalui kain kasa kedalam bikar
8. Hasil saringan dimasukkan ke dalam tabung emparan dan tambah lagi larutan zink sulfat untuk memenuhkan tabung itu sehingga 3-4 mm di bawah paras mulut tabung tersebut.
9. Tabung emparan di imbang dan di empar selama 1 minit pada kelajuan yang tertinggi (2300 psm ) dan biarkan berhenti sendiri tanpa gangguan
10. Selepas 15 -20 saat dan tanpa mengeluarkan
Teknik Pengapungan Brine (NaCl)
Prinsip/objektif :
Teknik ini berdasarkan kepada prinsip pengapungan telur helmint dan sista protozoa.Telur helmint yang selalu terdapat di dalam usus seperti cacing kerawit ,Ascaris dan Trichuris tidak akan rosak melalui proses ini ,tetapi telur Strongylooides serta sista protozoa akan mengecut dengan teruk sekali.
Kebaikan :
· Suatu teknik kualitatif.sesuai untuk mengumpulkan telur nematode seperti Ascaris,Trichuris,cacing kerawit dan Strongyloides sp
Kelemahan :
· Tidak sesuai untuk telur trematod,sestod dan telur ascaris yang tidak disenyawakan
· Tidak sesuai untuk hamper ke semua protozoa usus kerana ia akan mengecut
· Tidak dapat mengapungkan larva nematode (Strongyloides)
Alat radas/material :
· Sisip kaca
· Kain kasa
· Botol universal
· Larutan brine (NaCl tepu,S.G 1.20)
· Feses
· bikar
Prosedur/kaedah :
1. Satu sampel feses sebesar kacang jika keras atau terbentuk atau 1-2 ml jika specimen cair dicampur rata dengan brine sebanyak 10 kali ganda isipadunya dalam bikar.
2. Sampel itu di tapis melalui kain kasar untuk membuangkan unsure-unsur yang lebih kasar
3. Pindahkan hasil saringan ke dalam sebuah botol universal
4. Botol universal di isi sepenuhnya supaya sisip kaca bersih yangdiletakan pada mulut botol tidak akan memerangkap udara di antara sisip dengan larutan ampaian
5. Biarkan selama 30 minit
6. Sisip kaca di angkat dengan perlahan-lahan tanpa menjatuhkan larutan ampaian yang telah melekat
7. Iodine/eosin di titiskan dan lekatkan dengan penutup kaca dan diperiksa di bawah mikroskop.
Perbincangan
v Teknik kepekatan dilakukan untuk memisahkan objek parasit (sista,trofozoit protozoa,larva,telur dan peringkat dewasa helmint)daripada feses berdasarkan perbezaan gravity spesifik.Teknik ini di lakukan untuk mengesan infeksi ringan dimana teknik apusan feses langsung biasanya negatif.Teknik ini menggunakan kaedah teknik pemendapan (teknik pemendapan gravity dan teknik pemendapan formalin-eter) dan pengapungan.
v Teknik pemendapan menggunakan larutan yang mempunyai gravity spesifik lebih rendah daripada objek parasit.Parasit terkumpul dibahagian dasar.Teknik pemendapan gravity digunakan untuk mendapat semua jenis telur,larva helmint dan sista protozoa.teknik ini tidak mengubah bentuk /morfologi parasit dan boleh didapati peringkat parasit yang masih hidup.Selepas menggunakan teknik ini telur,sista protozoa ,hablur,serabut sayuran,sel gentian dan larva dikenalpasti.
v Teknik formalin-eter digunakan untuk mengenalpasti telur helmint dan sista protozoa daripada feses.Penggunaan formalin eter boleh meningkatkan keberkesanan pengemparan.Formalin berfungsi sebagai bahan pengawet manakala eter akan di serap oleh bahan feses dan menjadikannya lebih ringan daripada air.Selepas menggunakan teknik ini,didapati sista,pilin sayuran,gentian otot,larva dan telur helmint dikenalpasti.
Kesimpulan
v Pelajar dapat mengenalpasti sista protozoa dan bahan-bahan lain dengan menggunakan teknik pemendapan gravity dan teknik pemendapan formalin-eter.
Perbincangan
v Teknik kepekatan dilakukan untuk memisahkan objek parasit (sista,trofozoit protozoa,larva,telur dan peringkat dewasa helmint)daripada feses berdasarkan perbezaan gravity spesifik.Teknik ini di lakukan untuk mengesan infeksi ringan dimana teknik apusan feses langsung biasanya negatif.Teknik ini menggunakan kaedah teknik pemendapan dan pengapungan(teknik pengapungan zink sulfat dan teknik pengapungan brine).
v Teknik pengapungan menggunakan larutan yang mempunyai gravity spesifik yang lebih tinggi daripada objek parasit.parasit akan terapung dipermukaan larutan.Teknik pengapungan zink sulfat menggunakan prinsip pengapungan telur-telur cacing dan sista protozoa.cara ini sesuai sekali bagi kepekatan sista protozoa,telur helmint dan larva dalam keadaan dimana diagnosis mudah dilakukan.Selepas menggunakan teknik ini,didapati telur helmint dan sista protozoa dikenalpasti.
v Teknik pengapungan brine menggunakan prinsip pengapungan telur helmint dan sista protozoa.Telur helmint yang selalau terdapat didalam usus seperti cacing kerawit,Ascaris dan Trichuris tidak akan rosak melalui proses ini,tetapi telur strongyloides serta sista protozoa akan mengecut dengan teruk sekali.
Kesimpulan
v Pelajar Berjaya melakukan eksperimen ini dan mengenalpasti telur helmint sista protozoa.
PENGARUH Ph KE ATAS AKTIVITI ENZIM
Objektif : Menentukan pH optimum bagi tindak balas enzim alkali fosfatase.
Bahan Kimia :
v Penimbal glisin Ph 10
v Alkali Fosfatase
v 5 Mm p-nitrofenol fosfat (substrat)
v 0.02 m NaOH
Bahan kaca :Tabung uji
Alat radas :Spektrofotometer
Prosedur :
1. Sediakan tabung uji
| Tabung uji | 1(pH 4) | 2(pH 6) | 3(pH 9) | 4(pH10) | 5(Ph 13) |
| Kandugan Ph | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| Penimbal glisin pH 10(ml) | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 5 Mm p-nitrofenol (ml) | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
Ø Campurkan kandungan tabung uji dan masukkan dalam meter bath pada suhu
Ø 37 C .Eramkan selama 5 minit.
Ø Kemudian tambahkan 0.2 ml alkali fosfatase mengikut masa yang telah di tetapkan.
Ø Masa(min) 0 0.5 1.0 1.5 2.0
Ø Eramkan kesemua tabung uji selama 10 minit
Ø 8.0 m 0.02 m NaOH ditambah dengan segera pada setiap tabung uji.
2. Sediakan tabung uji kawalan
Ø tambahkan 1.0 ml penimbal 0.2 ml substrat dan 0.2ml air.
Ø Eramkan dalam mandian air pada suhu 37 C selama 15 minit.selepas eraman,tambahkan 8 ml 0.02 m NaOH dengan segera.
3. Selepas itu bacaan di ambil pada ketumpatan otikal 410 Mm.
4. Sediakan plot graft aktiviti enzim melawan Ph.
SUMBER: Pelajar yang mengambil subjek ini.
